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人5-脂氧合酶(5-LOX)elisa试剂盒说明书

点击次数:1648 发布时间:2011/2/15
提 供 商: 上海锐谷生物科技有限公司 资料大小:
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详细介绍:

5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒试剂盒名称】

5-脂氧合酶(5-LOX)定量检测试剂盒(ELISA

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒试剂盒用途

定量检测人血清、血浆及相关液体样本中5-脂氧合酶(5-LOX的含量。

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒检测原理

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被5-脂氧合酶(5-LOX单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物AB,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中5-脂氧合酶(5-LOX)浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中5-脂氧合酶(5-LOX含量。

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒试剂盒组成

 

1

酶标包被板

12×8

7

显色剂A

6mL

2

标准品

0.3mL×6

8

显色剂B

6mL

3

20倍浓缩洗涤液

25mL

9

终止液

6mL

4

样本稀释液

6mL

10

说明书

1

5

特殊稀释液

6mL

11

封板膜

2

6

酶标试剂

6mL

12

密封袋

1

 

备注:标准品(16号)浓度依次为:480240120603015 U/L.

 

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材

137恒温箱

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

5、一次性试管

6、吸水纸

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒操作步骤】

1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。

2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

4、温育:37水浴锅或恒温箱温育30min

5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

6、加酶标工作液:每孔加入酶标工作液50μL,空白对照孔不加。

7、温育:37水浴锅或恒温箱温育30min

8、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

9、显色:每孔先加入显色剂A 50μL,再加入显色剂B 50μL,平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s),37避光显色15min

10、终止:取出酶标板,每孔加终止液50μL,终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。

11、测定:以空白孔调零,在终止后15分钟内,用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

12、计算:根据标准品的浓度及对应的OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒样本要求】

1、样本不能含叠氮钠(NaN3,因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

3、样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。

【人5-脂氧合酶(5-LOXElisa试剂盒注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。

5、本试剂盒定量范围为15-480U/L,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(15-480U/L范围内),乘以总稀释倍数即为样本zui终浓度。

6、若显色过浅,可适当延长底物温育时间。

7、为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜

8、试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。

9、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

 
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